| 孙笑笑.长链非编码RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定[J].安徽医药,2016,20(7):. |
| 长链非编码RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定 |
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| 投稿时间：2016-04-20 录用日期：2016-05-30 |
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| 中文关键词: 长链非编码RNA Linc00461 shRNA 慢病毒载体 |
| 英文关键词: Long chain non coding RNA Linc00461 shRNA Lentivirus vector |
| 基金项目:1.国家自然科学基金批准号81172017 2重庆市教委课题 项目编号KJ1500202 |
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| 中文摘要: |
| 目的:制备shRNA干扰人长链非编码RNA Linc00461的慢病毒载体（shRNA- Linc00461），为深入研究长链非编码RNA功能奠定基础。方法：利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计，根据小干扰RNA的设计原则，选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送由公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒pSIH1-H1，形成pSIH1-H1-shRNA- Linc00461质粒。用PCR及测序对其进行鉴定，之后与慢病毒包装质粒混匀，由脂质体转染至HEK293T细胞进行包装，产生慢病毒shRNA- Linc00461，并收集上清液使其感染乳腺癌MDA-MB-231细胞，通过RT-PCR鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的Linc00461感染MDA-MB-231，MTT和流式细胞术检测细胞增殖和周期改变。结果： SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经PCR验证和测序后，证实其构建成功。shRNA- Linc00461在HEK293T细胞中重组成慢病毒，并成功感染MDA-MB-231，感染效率约为70%。shRNA-Linc00461感染乳腺癌MDA-MB-231细胞后Linc00461的表达下调65.32%； 感染shRNA-Linc00461第3天MTT 结果显示：实验组吸光度值（0.232±0.032）明显低于实验对照组（0.398±0.037）。流式结果提示实验组G2M 期细胞（47.55±5.063）％高于实验对照组（8.876±3.565）％。结论：成功构建了shRNA- Linc00461慢病毒载体，并能有效抑制Linc00461表达，为深入研究人Linc00461基因功能奠定了基础。 |
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