过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立

文丽梅; 卢帅; 吕国栋; 李亚芬; 郑璇; 田春艳; 赵军; 王建华

文章摘要

文丽梅,卢帅,吕国栋,等.过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立[J].安徽医药,2019,23(1):37-41.

过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立

Establishment of cell model of oxidative stress induced by hydrogen peroxide in BEL7402 cells

投稿时间：2017-07-27

DOI：

中文关键词: 过氧化氢人肝癌细胞氧化性应激细胞培养技术 DNA损伤流式细胞术彗星试验

英文关键词: Hydrogen peroxide Human hepatoma cell Oxidative stress Cell culture techniques DNA damage Flow cytometry Comet assay

基金项目:国家自然科学基金项目(81560607)；省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室项目(SKL-HIDCA-2017-Y7)；新疆维吾尔自治区药学会项目(YXH201704) 过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立文丽梅1,2,3,卢帅^1,2,吕国栋^1,4,李亚芬^1,3,郑璇^1,3,田春艳^1,3,赵军^1,2,王建华^1,2(1.省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054；².新疆医科大学第一附属医院,药学部临床药学科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054;⁴.新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054； 3.新疆医科大学药学院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054)

作者	单位
文丽梅	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学第一附属医院,药学部临床药学科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学药学院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
卢帅	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学第一附属医院,药学部临床药学科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
吕国栋	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
李亚芬	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学药学院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
郑璇	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学药学院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
田春艳	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学药学院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
赵军	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学第一附属医院,药学部临床药学科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054
王建华	省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054 新疆医科大学第一附属医院,药学部临床药学科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 830054

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中文摘要:

目的研究过氧化氢(H₂O₂)构建体外人肝癌细胞BEL7402氧化应激模型的最佳作用浓度及时间。方法采用噻唑蓝(MTT)染色法检测以10、100和1 000 μmol/L的H₂O₂处理0、2、4、6、8、10、12和24 h后BEL7402细胞的存活率；采用双氢罗丹明123(DHR123)探针法、单细胞凝胶电泳技术和分光光度法检测以100 μmol/L H₂O₂处理BEL7402细胞4 h后线粒体活性氧(ROS)含量、DNA损伤、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果 100 μmol/L H₂O₂处理BEL7402细胞4 h后,其存活率为(43.44±5.74)%,与10 μmol/L H₂O₂处理组(92.77±5.51)%相比,细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01)；ROS含量结果显示100 μmol/L H₂O₂处理BEL7402细胞40 min时其体内的ROS含量达到峰值,之后呈下降趋势；与健康对照组比较,100 μmol/L H₂O₂组OTM值升高(P<0.05),MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.01),SOD和GSH-Px活性均下降(P<0.05或P<0.01)。结论 100 μmol/L H₂O₂、预处理4 h,可成功构建BEL7402细胞体外氧化应激模型,可为通过氧化应激机制抗肝病新药的研发奠定基础。

英文摘要:

Objective To establish the experimental model of oxidative stress,based on the optimal concentration and intervention time of H₂O₂.Methods The MTT method were adopted to detect the cell survival rates that 0,2,4,6,8,10,12 and 24 h exposure to 10 μmol/L,100 μmol/L and 1 000 μmol/L H₂O₂ on BEL7402 cells.The ROS content,DNA damage,content of MDA,the activity of SOD and GSH-Px of 4 h exposure to 10,100 and 1 000 μmol/L H₂O₂ on BEL7402 cells were detected by the DHR123 method,single cell gel electrophoresis technique and spectrophotometry method.Results Cell survival rate was,Compared with 10 μmol/L H₂O2 group(92.77±5.51)%,the cell survival rate of BEL7402 cells treated with 100 μmol/L H₂O₂ for 4 h (43.44±5.74) %,was decreased,with significant difference (P<0.01).And the reactive oxygen species (ROS) content in BEL7402 cell reached the peak at 40 min during H₂O₂ intervention.of In the 100 μmol/L H₂O₂ group,the oliver tail moment (OTM value) were increased (P<0.05),while the MDA decreased (P<0.01).The activity of SOD and GSH-Px decreased (P<0.05 or P<0.01).Conclusion With 100 μmol/L H₂O₂,pre-treated for 4 h can successfully construct the BEL7402 cell model,which lay the foundation for the research and development of novel anti-hepatopathy drug with oxidative stress mechanism.

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